一、目的及要求
1.了解高效液相色谱仪的基本结构组成。
2.初步了解流动相的选择、溶剂及样品处理方法。
3.高效液相色谱仪的基本操作及维护方法。
二、实验原理
高效液相色谱法是继气相色谱之后，于20世纪70年代初期发展起来的一种以液体为流动相的现代色谱技术。高效液相色谱法引用了气相色谱的理论，将流动相改为高压输送（最高输送压强可达4.9×107Pa）；色谱柱是以特殊的方法用小粒径的填料填充而成的，从而使柱效大大高于经典液相色谱（每米塔板数可达几万或几十万）；同时，柱后连有高灵敏度的检测器，可对流出物进行连续检测。因此，高效液相色谱法具有分析速度快、分离效能高、自动化等特点。所以人们也称它为高压、高速或现代液相色谱法，已成为色谱法的一个重要分支。
高效液相色谱分离原理及分类和气相色谱一样，其分离系统也由两相——固定相和流动相组成。固定相可以是吸附剂、化学键合固定相（或在惰性载体表面涂上一层液膜）、离子交换树脂或多孔性凝胶；流动相是各种溶剂。被分离混合物是由流动相液体推动进入色谱柱，根据各组分在固定相及流动相中的吸附能力、分配系数、离子交换作用或分子尺寸大小的差异得到分离的。分离的实质是样品分子（以下称溶质）与溶剂（即流动相或洗脱液）以及固定相分子间的作用，作用力的大小决定了色谱过程的保留行为。根据分离机制不同，液相色谱可分为：液固吸附色谱、液液分配色谱、化学键合色谱、离子交换色谱以及分子排阻色谱等类型。
液相色谱所用基本概念如保留值、塔板数、塔板高度、分离度、选择性等与气相色谱一致，所用的基本理论：塔板理论、速率方程也与气相色谱基本一致；但所用的流动相与气相色谱不同。此外，液相色谱所用的仪器设备和操作条件也与气相色谱不同。所以，液相色谱与气相色谱在应用范围（高沸点化合物、非挥发性物质、热不稳定化合物、离子型化合物及高聚物的分离）、样品分离难度、柱外效应、样品制备与溶剂回收等方面有一定的差别。
三、仪器与试剂
1.仪器
Agilent LC1200高效液相色谱仪（由G1311A（四元泵），进样器，VWD检测器和记录系统组成）
色谱柱：5 cm×4.6 mm I.D.，Kromasil-C18H37（ODS），10μm
2.试剂
流动相：甲醇／水（80／20）
乙腈／水（80／20）
四、实验步骤
1.熟悉仪器结构组成。
2.熟悉色谱操作软件。
3.了解色谱柱的基本分类及构成。
4.学会超声波及溶剂过滤器的使用方法。
5.了解流动相的选择及溶剂处理方法。
6.初步学会色谱仪器的操作。
五、思考题
1.高效液相色谱与气相色谱在仪器结构及工作原理上有什么不同？
2.为什么溶剂和样品要过滤？
3.流动相使用前为什么要脱气？
4.如何选择液相色谱分离的流动相？
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