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分光光度计的使用_实用生物化学实验

    八、分光光度计的使用

    (一)721型分光光度计的使用

    721型分光光度计是一种国产、常用的分光光度计,适用于400~760nm的波长范围。

    (1)首先应将仪器放置在温度、湿度适宜的室内,室内照明不宜过强,仪器应置于牢固平稳的水平台面上,避免引起震动。

    (2)在仪器未接通电源时,电表指针应位于“0”[T]刻线上,必要时可将电表上的校正螺丝调节到“0”位,但一般已调整好,无须调整。

    (3)接通电源(指示灯亮),打开比色皿暗盒盖(此时光门关闭),电表指针处于“0”[T]位,预热20min。

    (4)转动波长选择旋钮,选用所需的单色光波长,并根据所选择波长用相应的放大灵敏度挡,原则是能使空白溶液良好地用光量调节器调整T=100%处。一般选择“1”挡,各挡的灵敏度范围是:第一挡×1倍;第二挡×10倍;第三挡×20倍。

    (5)闭上比色皿暗盒盖(这时光门打开),使空白溶液比色皿对准光路。旋转光量调节器至“100.0”处,使电表指针准确指向“100%”[T](或A=0)。

    (6)按上述方法,重复操作3~4次,连续几次调“0”[T]和“100%”[T],仪器即可进行测定。

    (7)拉动比色皿座的拉杆,使测定管的比色皿依次进入光路,从刻度盘上读取吸光度(A)值,并作记录。

    (8)测定完毕,取出比色皿。若仪器停止工作,开关应拨至“关”的位置,同时切断电源,将比色皿暗盒盖盖好,清洗比色皿。

    (二)722型分光光度计的使用

    安装好仪器后,检查样池位置,使其处在光路中(拉动样品拉手时应感到每挡的定位)。关好样品室门,打开仪器电源开关,工作方式选择指示灯应在透射比位置,使标样点在第一点,显示器应显示为××.×,预热10min,即可以进行测量。

    1.透射比测量

    在样池中,放置空白溶液及样品溶液。

    (1)按需要调节波长旋钮,使显示窗显示所需波长值。

    (2)按方式选择键使透射比(T)指示灯亮,并使空白溶液处在光路中。

    (3)按[T]键调T=100%,待显示器显示“100.0”时即表示已调好。

    (4)在样池架中放挡光板,拉入光路,关好样品室门,观察显示是否为0.0,如不为0.0则按[T]键调零。

    (5)取出挡光板,放入空白溶液,关好样品室门,显示器应显示100.0,若不为100.0则应重调[T]键(重复步骤(3))。

    (6)拉动样品拉手使被测样品依次进入光路,则显示器上依次显示样品的透射比值。

    2.吸光度测量

    吸光度测量的步骤与透射比测量的基本相同,只是有两点要注意。

    (1)调零:按方式选择键选透射比,放入空白管调T=100%,放入挡光板调T=0%。

    (2)测吸光度时,按方式选择键选ABS挡进行测定。

    (三)UV-9200型紫外可见分光光度计的使用

    安装好仪器后,检查样池位置,使其处在光路中(拉动样品拉手时应感到每挡的定位)。关好样品室门,打开仪器电源开关(若联机使用打印机,则应先开主机后开打印机),工作方式选择指示灯应在透射比位置,工作曲线选择点应在第一点,显示器应显示为××.×,预热10min,即可以进行测量。

    1.透射比测量

    在样品室中,放置空白溶液及样品溶液。

    (1)按需要调节波长旋钮,使波长显示窗显示所需波长值。

    (2)按方式选择键使透射比指示灯亮,并使空白溶液处在光路中。

    (3)按[T]键调T=100%,待显示器显示100.0时即表示调好。

    (4)打开样品室门在样池架中放挡光板,关闭样品室门,观察显示器是否为0.0,如不为0.0,则按[T]键调零。

    (5)取出挡光板,放入空白溶液,关好样品室门,显示器应显示100.0,若不为100.0则应重调[T]键(重复步骤(3))。

    (6)拉动样品拉手使被测样品依次进入光路,则显示器上依次显示样品的透射比值。

    2.吸光度测量

    吸光度测量的步骤与透射比测量的基本相同,只是有一点要注意:按方式选择键时,应使吸光度ABS指示灯亮。

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