【原理】 抗人球蛋白试验又称Coombs试验,是检测自身免疫性溶血性贫血的自身抗体(IgG)的试验。通过直接抗人球蛋白试验(direct antiglobulin test,DAGT)和间接抗人球蛋白试验(indirect antiglobulin test,IAGT)检测红细胞表面的不完全抗体。直接试验是在经盐水洗涤后的致敏红细胞悬液中加入抗人球蛋白血清,观察是否发生凝集。间接试验是在正常人Rho(D)阴性O型或同型的红细胞中加入病人血清,若血清中有不完全抗体,即可使红细胞致敏,这种致敏的红细胞洗涤后加入抗人球蛋白血清,将发生红细胞凝集现象,即为间接试验阳性。
【试剂】
1.抗人球蛋白血清。
2.抗D血清。
3.AB型血清。
4.受检者血清。
5.0.9%生理盐水。
【操作方法】
1.直接抗人球蛋白试验 取受检者抗凝血2ml,离心去血浆,用生理盐水洗涤3~5次,配成2%红细胞悬液。各种红细胞悬液制备见表7-13。
表7-13 各种红细胞悬液制备
混匀,5min后观察结果或低速离心后观察结果。混匀,5min后观察有无红细胞凝集或低速离心后观察结果。混匀,37℃水浴1h,离心去上清,每管用生理盐水洗涤红细胞3~5次,配成2%红细胞悬液后按表7-14操作。
表7-14 直接抗人球蛋白凝集试验操作步骤
2.间接抗人球蛋白试验 各种红细胞悬液制备同上,间接抗人球蛋白凝集试验按表7-15操作。
表7-15 间接抗人球蛋白凝集试验操作步骤
【参考值】 正常人直接和间接抗人球蛋白试验均为阴性。
【临床意义】 自身免疫性溶血性贫血、冷凝集素综合征、新生儿同种免疫性溶血性贫血、Rh血型不合者、阵发性睡眠性血红蛋白尿、药物性免疫性溶血等直接抗人球蛋白试验阳性,ABO血型不合者直接和间接试验常为阴性或弱阳性。当抗体与红细胞结合后,有过剩抗体时直接和间接试验均为阳性。其他如结缔组织病、淋巴细胞增殖性疾病、肿瘤、传染性单核细胞增多症、某些慢性的肝肾疾病等直接抗人球蛋白试验可出现阳性结果。
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