基因片段结构

    目前分离、获取目的基因的方法大致有以下几种：

    1．化学合成法　如果已知多肽链的氨基酸排列顺序，可利用遗传密码表推断其编码基因的核苷酸顺序，再进行人工合成。此法适用于编码小分子肽的基因。

    2．从基因组文库筛选　从机体细胞染色体中提取出全部DNA，用限制酶将其切割成许多DNA片断，将这些片断与适当载体连接，再转入宿主细胞扩增，使每一个宿主细胞都携带一种重组DNA分子的多个拷贝。这许多宿主细胞组成一个含基因组各DNA片段的集合体，就称为基因组DNA文库。可用适宜的方法如探针技术，从文库中筛选出特定的目的基因片断。

    3．从mRNA合成cDNA　将某种细胞全部mRNA通过反转录合成cDNA，去除RNA链后，再利用DNA聚合酶合成双链cDNA片断，并与适当载体连接，然后转入宿主细胞进行扩增，得到含有全部表达基因的集合体，称为cDNA文库。再用适宜的方法从文库中筛选目的基因片断。

    4．利用聚合酶链反应合成　如果已知目的基因的序列，可通过聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）技术从基因组DNA或cDNA中高效扩增出目的基因片断。PCR技术基本原理是以拟扩增的DNA分子为模板，以一对分别与模板两条链3′末端互补的寡核苷酸片断为引物，在耐热的DNA聚合酶的作用下，按照半保留复制机制合成新的DNA分子。重复这一过程，即可使目的基因片段得到扩增。