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茚三酮反应

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茚三酮反应

茚三酮反应_生物化学实验

    四、茚三酮反应

    (一)实验原理

    凡含有自由氨基的化合物,如蛋白质、多肽、各种氨基酸(除脯氨酸、羟脯氨酸与茚三酮反应产生黄色物质外)和伯胺化合物(包括氨)与茚三酮共热时,都能生成紫色化合物,这种反应称为茚三酮反应。所有α-氨基酸及一切蛋白质都能和茚三酮反应生成蓝紫色物质。

    该反应灵敏度高,1∶1500000浓度的氨基酸水溶液即呈现茚三酮反应,是一种常用的氨基酸定量测定方法。

    茚三酮反应分为两步,第一步是氨基酸被氧化形成CO2、NH3和醛,水合茚三酮被还原成还原型茚三酮;第二步是所形成的还原型茚三酮同另一个水合茚三酮分子和氨缩合生成有色物质。反应机理如下:

    img17

    茚三酮反应的适宜pH值为5~7,同一浓度的蛋白质或氨基酸在不同pH条件下的颜色深浅不同,酸度过大时甚至不显色。

    (二)实验药品

    1.蛋白质溶液:新鲜鸡蛋白溶液(鸡蛋清:水=1∶9);

    2.0.5%甘氨酸溶液;

    3.0.1%茚三酮水溶液;

    4.0.1%茚三酮-乙醇溶液。

    (三)实验方法

    1.取2支试管,分别加入蛋白质溶液1ml和甘氨酸溶液1mL,再各加0.5mL0.1%茚三酮水溶液混匀,在沸水浴中加热1~2min,待冷却后溶液即呈粉红色,以后慢慢变成紫色或蓝色。

    2.在一小块滤纸上滴上1滴0.5%的甘氨酸溶液,风干后,再在原处滴上1滴0.1%的茚三酮乙醇溶液,用微火烘干显色,观察紫红色斑点的出现。

    (四)实验记录

    img18

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