蛋白质等电点的测定

蛋白质等电点的测定_生物化学实验

    一、蛋白质等电点的测定

    （一）实验目的

    1．了解蛋白质的两性解离性质。

    2．学习测定蛋白质等电点的一种方法。

    （二）实验原理

    蛋白质在酸性或碱性溶液中，分别带有正、负电荷，它们相互排斥，不容易发生沉淀。当溶液的pH值发生改变而使蛋白质分子所带正、负电荷数接近相等时，即失去同电相斥的作用。因此，蛋白质分子很容易彼此结合而沉淀，此时溶液的pH值称为该蛋白质的等电点。不同蛋白质各有其特异的等电点。在等电点时，蛋白质的理化性质都有变化，可利用此种性质的变化测定各种蛋白质的等电点。最常用的方法是测其溶解度最低时的溶液pH值。

    本实验观察在不同pH值溶液中的溶解度以测定酪蛋白的等电点。用醋酸与醋酸钠（醋酸钠混合在酪蛋白溶液中）配制成各种不同pH值的缓冲液。向各缓冲溶液中加入酪蛋白后，沉淀出现最多的缓冲液的pH值即为酪蛋白的等电点。

    （三）实验药品、实验设备

    1．0.5％酪蛋白醋酸钠溶液50mL：称取纯酪蛋白0.25g置于50mL容量瓶内，准确加入蒸馏水20mL及1mol/L NaOH 5mL摇匀，使酪蛋白溶解，然后准确加入1mol/L醋酸溶液5mL，最后用蒸馏水稀释至刻度；

    2．0.01mol/L醋酸；

    3．0.1mol/L醋酸；

    4．1 mol/L醋酸。

    5．试管，试管架，移液管，50mL容量瓶。

    （四）实验方法

    1．取同样规格的试管5支，按表2-5中要求，分别准确加入各试剂，混匀。表2-5中最末列为pH值参照数据。

    2．加酪蛋白的醋酸钠溶液1mL，边加边摇动（切勿在各管加完后才摇动），pH值于各试管中依次为5.9、5.3、4.7、4.0、3.5，观察各管浑浊度，静置10～30min后，比较各管浑浊度。沉淀最多而且清液较透明的试管的pH值，即为酪蛋白的等电点。

    表2-5　蛋白质等电点的测定

    

    （五）实验记录